三聚氰胺
快速檢測試劑盒說明書
一、原理
本試劑盒采用間接競爭ELISA方法，在微孔條上預包被偶聯抗原，樣本中的殘留物三聚氰胺將和微孔條上預包被的偶聯抗原競爭抗三聚氰胺抗體，加入酶標記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光值與其所含殘留物三聚氰胺的含量成負相關，與標準曲線比較即可得出相應殘留物三聚氰胺的含量。
二、試劑盒特性
生鮮乳、液態奶 ··································· 5 ppb
酸奶、奶粉 ········································ 10ppb
三聚氰胺 ········································· 100%
生鮮乳、液態奶 ··························· 90% ±25%
酸奶、奶粉 ································· 80% ±25%
三、試劑盒組成
1 | 微量測試孔 | 每條8孔，一板12條 | |
2 | 標準液×6瓶 （1ml/瓶） | 0ppb | 0.5ppb |
1.5ppb | 4.5ppb | ||
13.5ppb | 40.5ppb | ||
3 | 酶標記物 | 7ml | 紅色帽 |
4 | 抗體工作液 | 7ml | 藍色帽 |
5 | 底物A液 | 7ml | 白色帽 |
6 | 底物B液 | 7ml | 黑色帽 |
7 | 終止液 | 7ml | 黃色帽 |
8 | 20X濃縮洗滌液 | 15ml | 白色帽 |
9 | 20X樣本提取液 | 50ml | 透明帽 |
10 | 5X樣品稀釋液 | 50ml | 藍色帽 |
四、所用儀器、試劑
具備的儀器：酶標儀、振蕩器、離心機、刻度移液管、天平（感量0.01g）
微量移液器：單道 20µl～200µl、單道100µl～1000µl、多道 30～300 µl
五、樣本前處理步驟
（a）實驗中必須使用一次性吸頭，吸取不同試劑時要更換吸頭。
（b）實驗之前須檢查各種實驗器具是否干凈，必要時可對實驗器具進行清潔，以避免污染干擾實驗結果。
試劑1：樣本提取液
將20X樣本提取液與去離子水1:19稀釋備
用。
試劑2：樣品稀釋液
將5X樣品稀釋液與去離子水1:4稀釋備用。
（a）牛奶（純牛奶、生鮮乳等液體奶）樣本處理
樣本稀釋倍數: 1倍
備注：較為粘稠的酸奶、煉乳制品無法使用此方法檢測。
（b）奶粉樣本處理
樣本稀釋倍數: 10倍
（c）酸奶樣本處理
樣本稀釋倍數: 5倍
六、 酶標免疫分析程序:
七、結果判定
結果判定有兩種方法，粗略判定可用第1種方法，定量判定用第2種方法。注意樣本吸光度值與其所含三聚氰胺量成負相關。
1、粗略判定：
用樣本的平均吸光度值與標準值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設樣本1的吸光度值為0.3，樣本2的吸光度值為1.0，標準液吸光度值分別是：0ppb為2.043； 0.5ppb為1.554；1.5ppb為1.015；4.5ppb為0.474；13.5ppb為0.151；40.5ppb為0.055。則樣本1的濃度范圍是4.5ppb～13.5ppb；樣本2的濃度范圍是1.5ppb～4.5ppb，乘以其對應的稀釋倍數即為樣本中三聚氰胺實際濃度。
2、定量分析
（1）百分吸光率的計算，標準品或樣本的百分吸光率等于標準品或樣本的百分吸光度值的平均值（雙孔）除以第--個標準（0標準）的吸光度值，再乘以100%，即
百分吸光度值（%）＝ | B | ×100% |
B0 |
B—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值
B0—0ng/ml標準溶液的平均吸光度值
（2）標準曲線的繪制與計算
以標準品百分吸光率為縱坐標，以三聚氰胺標準品濃度（ng/ml）的半對數為橫坐標，繪制標準曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標準曲線中，從標準曲線上讀出樣本所對應的濃度，乘以其對應的稀釋倍數即為樣本中三聚氰胺實際濃度。
若利用試劑盒專業分析軟件進行計算，更便于大量樣本的準確、快速分析。
八、 注意事項
九、儲藏條件和保質期
提示：酶標板真空包裝袋若有漏氣，酶標板仍然正常有效，不影響實驗結果，請放心使用。
