CCK-8試劑盒中含有WST–8：化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽，它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪 *（1-Methoxy PMS）的作用下被細胞線粒體中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲臜產(chǎn)物（Formazan），生成的甲臜物的數(shù)量與活細胞的數(shù)量成正比。用酶聯(lián)免疫檢測儀在450nm波長處測定其光吸收值，可間接反映活細胞數(shù)量。該方法已被廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測、大規(guī)模的抗腫瘤藥物篩選、細胞增殖試驗、細胞毒性試驗以及藥敏試驗等。
CCK-8試劑盒操作較繁雜,在操作中應(yīng)留神以下5個方面：
1. 跟著病況的進展或由其他因素影響，某些抗體在機體內(nèi)的含量發(fā)作大幅動搖，因此有必要對標(biāo)本進行預(yù)處理。間接法測定中，標(biāo)本恰當(dāng)稀釋還可下降非特異性反響。
2. 加樣一般運用加液器，在CCK-8試劑盒中一般有4次加樣：加標(biāo)本、加酶結(jié)合物、加底物和加間斷液。加標(biāo)本時有必要每份標(biāo)本運用一支移液器吸嘴，避免交叉污染。加酶結(jié)合物、底物和間斷液時則不需更換吸嘴。
3.在成批手藝檢測中，還應(yīng)留神操作時差的影響。加樣及混勻時間的差異，使抗原抗體反響和酶促反響時間不一致，對競爭法及定量檢測影響很大，不留神可能會導(dǎo)致過錯效果或定量不準。
4. 洗刷是CCK-8試劑盒操作過程中決議實驗勝敗的一個關(guān)鍵步驟。目的是除掉未結(jié)合的免疫反響物，間斷抗原抗體反響，除掉標(biāo)本中與反響無關(guān)的成分、游離的酶標(biāo)物以及反響過程中吸附于固相載體上的非特異性物質(zhì)。
5. 斷定效果須運用CCK-8試劑盒測讀儀，比色法判讀可選擇單波長或雙波長，根據(jù)反響液顏色的不同選用不同波長的濾光片，以空白孔校零測定反響孔的吸光度值。酶標(biāo)儀具有杰出的重復(fù)性。
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