多肽合成與修飾技術服務
實驗技術簡介:多肽合成是一個固相合成順序一 般從C端 (羧基端)向N端(氨基端)合成。過去的多肽合成是在溶液中進行的稱為液相合成法。從1963年Merrifield發展成功了固相多肽合成方法以來,經過不斷的改進和完善，到今天固相法已成為多肽和蛋白質合成中的一個常用技術，表現出了經典液相合成法*的優點，從而大大的減輕了每步產品提純的難度。多肽合成總的來說分成兩種:固相合成和液相多肽合成。
實驗技術原理:
多肽合成儀以固相合成為反應原理，在密閉的防爆玻璃反應器中使氨基酸按照已知順序(序列，一般從C端-羧基端向N端-氨基端)不斷添加、反應、合成，操作終得到多肽載體。固相合成法，大大的減輕了每步產品提純的難度。為了防止副反應的發生，參加反應的氨基酸的側鏈都是保護的。羧基端是游離的，并且在反應之前必須活化。
實驗操作流程:
1、去保護: Fmoc保護的柱子和單體必須用--種堿性溶劑(piperidine) 去除氨基的保護基團。
2、激活和交聯:下一個氨基酸的羧基被一種活化劑所活化。 活化的單體與游離的氨基反應交聯，形成肽鍵。在此步驟使用大量的超濃度試劑驅使反應完成。循環: 這兩步反應反復循環直到合成完成。
3、洗脫和脫保護:多肽從柱上洗脫下來，其保護基團被一種脫保護劑 (TFA)洗脫和脫保護。
多肽修飾類型:
1、C端標記技術:
C端酰胺化(Amidation,C-termainal)
醛基化(Aldehydes) 、醇基化(Alcohols) 、pNA (P-Nitroanilide)
AMC、AFC、巰基乙胺化(Cysteamide) 、酯基化(Ester) 、N-烷基化(N-AlkyI Amides)等
2、N端標記技術:
乙酰化Acetylated (Acetylated) 、Palmytolyl、 HYNIC、 生物素標記(Biotinylated)、 Br乙酰化(Bromoacetylated)螯合反應(DOTA, DTPA conjugated)、甲醛化(Formylated)、十四烷基、 十八烷基化(Myristoylated)琥珀酰化、棕櫚酸化、蘋果酸化、脂肪酸化等(Succinylated)
3、熒光標記修飾:
C端修飾: AFC, AMC, Dap(Dnp), Lys(Dye), pNA, Rh110
N端修飾: Bodipy-FL, Cy3, Cy5, Texas Red, 5-Tamra, 5-odoacetamido fluoresceinRhodamine 110 and Rhodamine B Luciferin, EDANS
FAM, FITC, MCA, Rox, Sulforhodamine 101, 5-TAMRA
4、環化反應:
首尾成環，中間成環，特殊成環(N -> C or Head to Tail)
2對二_硫鍵，3對二 硫鍵(Disulfide (S-S bond formation) .Triulide formation)天然產物活性肽成環(Cyclic-natural peptides )
5、甲基化修飾:
側鏈甲基化Lys(For),LysS(Me), Lys(Me)2, Lys(Me)3, Arg(Me)2 symmetrical, D-Tyr(Me),D-Tyr(Et)N端甲基化(N-Me Arg,N-Me-Asp, N-Me-Glu, N-Me-Leu, N-Me-Nle, N-Me-Nva, N-Me-Phe, N-Me-S N-
Me-Ser, N-Me-Trp, N-Me-Thr, N-Me-Val)
6、幾種特殊修飾:
各種偶聯(BSA, KL H conjugated peptides for antibody production )、磷酸化 (Phosphoserine,Phosphothreonine, Phosphotyrosine)、磺化 (Sulfated Tyrosine or Serine)、MAPS (MultipleAntigenic Peptide)、糖肽(Glycopeptides)PEG修飾(PEGylation)
實驗注意事項:
客戶提供:
1、多肽序列、數量、純度及特殊要求
2、凍干多肽可在-20度保存或室溫保存
3、溶液肽遠比凍干形式不穩定,溶液應為中性PH (5-7) -20度保存。
4、為避免樣品的反復凍融，hao分成小樣存放。
交付標準:
臺成多肽、數據.
其他:
大多數多肽的首xuan溶劑是超純抽氣水，稀Z酸或氨水分別對堿性或酸性多肽的溶解也有幫助。如果這些方法用過后還不溶解的多肽，建議用DMF,脲，guanidiniam,chloride ,acetonitnle來溶解
實驗代做服務：
ELISA試劑盒免費代檢測 | CCK8檢測 | 基因組DNA提取
| 蛋白相互作用分析 |
Western Blot
| 免疫組化 | 熒光定量PCR | 動物模型服務 |
流式細胞檢測 | 細胞增殖 | 激光共聚焦 | DNA甲基化實驗 |
細胞劃痕 | 鈣離子濃度檢測 | 掃描電鏡實驗 | microRNA 測序 |
動物實驗 | Taqman探針 | ATP/ADP檢測
| 石蠟/冰凍切片 |
定點突變 | 線粒體膜電位(MMP)檢測 | 細胞生長曲線的測定 | 藥理毒理動物實驗
|
免疫共沉淀 | 真核表達載體構建 | 染色質免疫沉淀CHIP | 非標定量（Label-free）實驗 |
